@phdthesis{oai:kitami-it.repo.nii.ac.jp:00008688,
 author = {Erdene, Bayar},
 month = {Mar},
 note = {Antibacterial activity of Bifidobacteria isolated from Mongolian infant feces was elucidated on pathogenic intestinal bacteria for the development of a new antibacterial Bifidobacteria by permission of the Mongolian Medical Ethics Committee Approval (MMECA). Forty-nine single colonies were totally obtained from 3 samples by using an enrichment BL agar medium. Among them, 29 isolates had Gram−positive, catalase−negative properties, and maul−like or Y−shaped morphology, and then, 20 Bifidobacterium breve and 9 Bifidobacterium longum strains were detected by the B. breve and B. longum specific primers. Organic acids produced by the isolated Bifidobacteria in their cell free supernatants were quantitatively analyzed by a spectrophotometric absorbance at 340 nm, suggesting that D−lactic, L−lactic, and acetic acids were produced, and the pH of the supernatants was at 3.86−4.55. The isolated Bifidobacteria showed antibacterial activity toward Escherichia coli and Salmonella typhimurium as high as that of standard Bifidobacteria, however, lower activity against Staphylococcus aureus. The antibacterial activity was probably due to the production of the organic acids.
 We aimed high antibacterial potential probiotic found for the development of a new antibacterial peptide. Thirty-six single colonies were totally obtained 15 samples of the faeces and rumen cud collected from Mongolian young livestock animals of around the three provinces (Tuv, Khovd, Khuvsgul). The 5-type species Bifidobacterium identified B.bifidum B.catenulatum, B.ruminantum, B.longum, B.pseudocatenulatum and 8 type species lactic acid bacteria Enterococcus alcedinis, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus hirae, Enterococcus lactis, Enterococcus mundti, Lactobacillus reuteri, and Lactobacillus plantarum by 16S rDNA sequencing analysis.
 Isolated from the lamb rumen B.bifidum (BBLA72) was produced 29.6 mmol per litres acetic acid and 19.3 mmol per litres of lactic acid, thereby releasing pH from 7.0 to 4.57. However, organic acids were produced small in comparison with other strains, the antibacterial activity of the pH neutralized up to 7.0 cell-free supernatant was more significant than other strains.
 BBLA 72 starts with early stationary phase and its antibacterial activity is the highest in 18 hours of bacterial culture. In the pH stabilization, bacterial resistance to 1-10 was active and 5, 6, and 7 did not significantly reduce the antibacterial activity.
 The arbitrary unit was measured 25600 AU/ml against to E.coli. It is preliminary for this substance as a bacteriocin-like substance that weighs 2 kDa and 5 kDa, capable of withstanding a 100-degree heat to 30 minutes, proteinase K and trypsin enzyme., モンゴルでは家畜に対して大量の抗生物質を投与し人の健康にも関わるため社会問題になっている。本研究では家畜用抗生剤に代わる安心安全な抗菌剤の開発を大きな目的に、ビフィズス菌が産生する有機酸や抗菌性ペプチドによる抗菌性について研究した。ビフィズス菌は、グラム陽性でカタラーゼ活性陰性の嫌気性腸内細菌の一種である。腸内環境を整えるために乳酸、酢酸などの有機酸を生成し、様々な生理機能を発揮する。産生された有機酸、酵素による分離同定、殺菌作用などビフィズス菌に関する多くの研究が報告されている。しかしビフィズス菌が生産する抗菌ペプチドについての研究は少ない。本研究の目的は、ビフィズス菌の抗菌性を明らかにして新しい抗菌性ペプチドを同定することにある。第2章ではモンゴル医療倫理委員会の許可の下、モンゴル人インファントから人ビフィズス菌の単離同定および有機酸による抗菌試験について検討した。第3章ではモンゴルのコプド、クプスグルおよびトゥブ州において家畜（子供）の第一胃および糞から、22のサンプルを収集し、抗菌性試験および抗菌ペプチドの単離を試みた。第1章は序論、第4章はまとめである。
　第2章では、5名のモンゴル人インファントから菌として49シングルコロニーを単離し、そのうち29コロニーはグラム陽性、カタラーゼ活性陰性で棒状またはY字形状であった。これらは20コロニーはB. breve、9コロニーはB. longum菌であることをそれぞれ16S rDNAプライマーによるPCRによって明らかにした。培養上澄みに産生した有機酸を吸光光度分析(340nm) によって定量的に解析した。上澄みにはD—およびL-乳酸、酢酸が生成していることが分かり、E. coli、S. typhimuriumに対して高い抗菌性を示すことを見出した。この抗菌性は有機酸によるものと推定した。
　第3章では、生まれて1ヶ月以内のヤギ、ラクダ、ヒツジ、ウサギなどの家畜22頭から試料を採取し、73のシングルコロニーを単離し、16Sr DNA汎用プライマーを用いて11のビフィズス菌を単離した。これらは有機酸による抗菌性を示したが;:pH7に中和したところ、LA72(B. bifidum)はSDS PAGE で2kDa と3kDa に2 本のバンドが現れ、これらはE. coliに対して25600AU/mlという高い抗菌性を示すことを見出した。プロテイナーゼKおよびトリプシン処埋するとバンドが消失し抗菌性も無くなることから抗菌性ペプチドと考えた。今後はこれらのペプチドの1次構造解析と大量培養による抗菌材料化、新たなビフィズス菌の探索などについて研究開発を続ける予定である。},
 school = {北見工業大学},
 title = {Elucidation of antibacterial activity of bifidobacteria},
 year = {2019},
 yomi = {エルデン, バヤル}
}